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小反刍兽疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒说明书兽用本试剂盒适用于羊的扁桃体、淋巴结和脾脏等组织病料和血液等液体病料中的小反刍兽疫病毒(PPRV)核酸检测。编号名称装量编号名称装量PPRV 01-q48PPRV qRT-PCR mix48管/盒PPRV 03-q48阳性对照20µlx8管/盒PPRV 02-q48PPRV qRT-PCR Buffer1000μlPPRV 04-q48阴性对照1000μl【保存期】 -20℃冷冻保存,有效期12个月。【规格】 48检份/盒【使用方法】1、样品采集、处理和病毒核酸提取样品参照《小反刍兽疫诊断技术》(GB/T 27982-2011)(www.qdregen.com下载中心)进行处理。使用核酸提取试剂盒则参照说明书处理样品。阳性对照在每个薄壁PCR反应管中加入20μlqRT-PCR Buffer复溶后直接使用,阴性对照与样品同步同样进行处理。2、qRT-PCR反应体系的配制每个反应体系20μl。在每个薄壁PCR反应管中加入18µl PPRV qRT-PCR Buffer进行复溶,然后加入2µl样品RNA、阳性对照和阴性对照RNA,标记并做好记录。3、qRT-PCR反应程序的设置1)48 ℃ 10 min;2)94 ℃ 3 min;3)94℃ 10s,60℃ 30s,共40个循环;设置60℃收集FAM荧光信号。【结果判定】1)阳性对照的Ct值小于等于28.0,同时阴性对照无Ct值且无扩增曲线,实验结果成立。2)被检样品Ct值小于等于30.0,且出现扩增曲线,为小反刍兽疫病毒核酸阳性;被检样品Ct值大于等于40.0,判定为阴性;被检样品Ct值大于30.0小于40.0为可疑,需重新提取核酸重复检测仍为可疑则判定为阳性。【注意事项】1、本试剂盒说明书未单独说明的事项,均参照《小反刍兽疫诊断技术》(GB/T 279...
小反刍兽疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒说明书(50头份) 【组分与用法】编号名称装量用法保存条件1反应阳性对照30 μl/管 ×1管直接使用-20°C保存2荧光RT-PCR反应液1075 μl/管 ×1管直接使用-20°C保存3酶混合液25 μl/管 ×1管直接使用-20°C保存 【未提供但是需要准备的试剂和耗材】1  无RNase的纯水。2  无RNase/DNase 的PCR反应管、Tips和1.5ml离心管等。 【作用与用途】用于检测多种临床样本(如鼻腔/口腔拭子、眼拭子以及淋巴结、脾、肾、直肠、结肠、肺等组织)中是否含小反刍兽疫病毒核酸。 【用法与判定】1  样本处理  可采用RNA纯化试剂盒手工提取或全自动核酸提取仪提取各类样本中的RNA。如在2小时内检测则提取的RNA置于冰上保存,否则置于﹣70ºC冰箱保存。2  扩增试剂准备  配制反应体系前,务必使荧光RT-PCR反应液完全溶解,并颠倒混匀几次,然后瞬时离心。每份被检样品使用1个PCR管,每管中依次加入:荧光RT-PCR反应液21.5 μl(含ROX参比荧光,可用于ABI 7500荧光PCR仪。其他荧光PCR仪无需要设置参比荧光),酶混合液0.5 μl,被检样品中提取的RNA溶液3 μl。每次检测需设置阳性对照和阴性对照(加3 μl)。阳性对照使用反应阳性对照品作为模板,阴性对照使用无RNA酶的纯水作为模板。3  RT-PCR反应  加样后,将PCR管置于荧光PCR仪内进行如下反应:50ºC反转录15 min;95ºC,3 min;然后进行40个循环的PCR扩增,扩增条件为94ºC 15s,...
小反刍兽疫病毒RT-PCR检测试剂盒说明书(50头份) 【组分与用法】编号名称装量用法保存条件1反应阳性对照品30 μl/管 ×1管直接使用-20°C保存2RT-PCR反应液1050 μl/管 ×1管直接使用-20°C保存3酶混合液50μl/管 ×1管直接使用-20°C保存【未提供但是需要准备的试剂和耗材】1  无RNase的纯水,购买或自己制备。2  无RNase/DNase的PCR反应管、Tips和1.5 ml离心管等【作用与用途】用于检测各种临床样本(如鼻腔/口腔拭子、眼拭子、淋巴结、脾、肾、直肠、结肠、肺等)中是否含小反刍兽疫病毒核酸。【用法与判定】1  样本处理  可采用Roche、QIAGEN等公司生产的手工RNA纯化试剂盒或其他全自动核酸提取仪提取各类样本中的RNA。如在2小时内检测则提取的RNA置于冰上保存,否则置于﹣80ºC冰箱保存。2  扩增试剂准备  配制反应体系前,务必使RT-PCR反应液完全溶解,并颠倒混匀几次,然后瞬时离心。每份被检样品使用1个PCR管,每管中依次加入:RT-PCR反应液21μl,酶混合液1μl,被检样品中提取的RNA溶液 3μl。每次检测设置标准阳性对照和标准阴性对照(加3μl)。标准阳性对照用反应阳性对照品作为模板,而标准阴性对照用无RNase的纯水作为模板。3  RT-PCR反应  加样后,将PCR管置于PCR仪内进行如下反应:50ºC,反转录30 min;然后94ºC, 2 min进行Taq酶的激活;接着进行35个循环的PCR扩增(扩增条件为94ºC, 20 sec,58ºC, 30 sec,72ºC, 30 sec...
病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒兽用本试剂盒适用于动物体液、分泌物及组织中病毒核酸的提取,可同时提取样本中的DNA和RNA;提取的核酸可直接用于后续的PCR或RT-PCR实验。编号名  称装  量保  存25检份/盒50检份/盒NAE 01消化液13 ml×1瓶26 ml×1瓶室温NAE 02抑制物去除液12.5 ml×1瓶25 ml×1瓶室温NAE 03漂洗液5 ml×1瓶10 ml×1瓶室温(使用前加无水乙醇)NAE 04蛋白酶 K500μl×1管1ml×1管2~8℃保存NAE 05Nuclease-free 水14 ml×1瓶28 ml×1瓶室温NAE 06核酸吸附柱和收集管25套50套室温【保存期】  有效期12个月。【规格】 (1)25检份/盒 (2)50检份/盒【使用方法】1、样品采集处理1.1 血清、血浆和淋巴液等无细胞体液样本采集:1.1.1血清采集:采集血液后应立即置于4℃冰箱中待血清析出。1.1.2血浆采集:需用EDTA抗凝剂抗凝血分离。1.2 拭子样本采集:采集拭子样本时采用专用拭子采集口咽分泌物、体液分泌物。1.3 组织样本采集:气管、肺、喉头、脾脏、扁桃体、肾脏和淋巴结等。1.3.1组织样品处理:选取病变明显的组织块剪取样品约20mg(可选择多部位剪碎混匀后再取,1粒大米重约20mg,组织取样量切忌太多,影响),依次加入150μl消化液、450μl Nuclease-free水和20μl蛋白酶K,用眼科剪反复多次剪碎混匀或用电动匀浆器匀浆,置56℃水浴中消化15~30分钟(视消化情况)后离心取上清。2、病毒DNA/RNA提取2.1 取上述处理后样本离心取上清100μl转入1.5ml离心管,加入300μl消化液...
伪狂犬病毒gB基因荧光PCR检测试剂盒说明书兽用本试剂盒适用于动物肺、扁桃体、淋巴结等组织病料和血液等液体病料中的伪狂犬病毒gB基因(PRV)核酸检测。编号名称装量编号名称装量PRVgB 01-q48PRVgB qPCR mix48管/盒PRVgB 03-q48阳性对照20µlx8管/盒PRVgB 02-q48PRVgB qPCR Buffer1000μlPRVgB 04-q48阴性对照1000μl【保存期】  -20℃冷冻保存,有效期12个月。【规格】 48检份/盒【使用方法】1、样品采集、处理和病毒核酸提取样品参照《伪狂犬病诊断技术》(GB/T 18641-2002)(www.qdregen.com下载中心)进行处理。使用核酸提取试剂盒则参照说明书处理样品。阳性对照在每个薄壁PCR反应管中加入20μl qPCR Buffer复溶后直接使用,阴性对照与样品同步同样进行处理。2、qPCR反应体系的配制每个反应体系20μl。在每个薄壁PCR反应管中加入18μl PRVgB qPCR Buffer进行复溶,然后加入2μl样品DNA、阳性对照和阴性对照DNA,标记并做好记录。3、qPCR反应程序的设置1)94 ℃ 3 min;2)94℃ 10s,60℃ 30s,共40个循环;设置60℃收集FAM荧光信号。【结果判定】1)阳性对照的Ct值小于等于28.0,同时阴性对照无Ct值且无扩增曲线,实验结果成立。2)被检样品Ct值小于等于30.0,且出现扩增曲线,为伪狂犬病毒gB基因核酸阳性;被检样品Ct值大于等于40.0,判定为阴性;被检样品Ct值大于30.0小于40.0为可疑,需重新提取核酸重复检测仍为可疑则判定为阳性。 【注意事项】1、本试剂盒说明书未单独说明的事项,均参照《伪狂犬病诊断技术》(GB/T 18641-2002)。2、PCR实验室应按功能分为...
伪狂犬病毒gE基因荧光PCR检测试剂盒说明书兽用本试剂盒适用于动物肺、扁桃体、淋巴结等组织病料和血液等液体病料中的伪狂犬病毒gE基因(PRV)核酸检测。编号名称装量编号名称装量PRVgE 01-q48PRVgE qPCR mix48管/盒PRVgE 03-q48阳性对照20µlx8管/盒PRVgE 02-q48PRVgE qPCR Buffer1000μlPRVgE 04-q48阴性对照1000μl【保存期】 -20℃冷冻保存,有效期12个月。【规格】 48检份/盒【使用方法】1、样品采集、处理和病毒核酸提取样品参照《伪狂犬病诊断技术》(GB/T 18641-2002)(www.qdregen.com下载中心)进行处理。使用核酸提取试剂盒则参照说明书处理样品。阳性对照在每个薄壁PCR反应管中加入20μl qPCR Buffer复溶后直接使用,阴性对照与样品同步同样进行处理。2、qPCR反应体系的配制每个反应体系20μl。在每个薄壁PCR反应管中加入18μl PRVgE qPCR Buffer进行复溶,然后加入2μl样品DNA、阳性对照和阴性对照DNA,标记并做好记录。3、qPCR反应程序的设置1)94 ℃ 3 min;2)94℃ 10s,60℃ 30s,共40个循环;设置60℃收集FAM荧光信号。【结果判定】1)阳性对照的Ct值小于等于28.0,同时阴性对照无Ct值且无扩增曲线,实验结果成立。2)被检样品Ct值小于等于30.0,且出现扩增曲线,为伪狂犬病毒gE基因核酸阳性;被检样品Ct值大于等于40.0,判定为阴性;被检样品Ct值大于30.0小于40.0为可疑,需重新提取核酸重复检测仍为可疑则判定为阳性。【注意事项】1、本试剂盒说明书未单独说明的事项,均参照《伪狂犬病诊断技术》(GB/T 18641-2002)。2、PCR实验室应按功能分为配液区、样品处理区、扩增...
 
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