口蹄疫3ABC抗体竞争ELISA检测试剂盒说明书
兽用
【兽药名称】
通用名称:口蹄疫3ABC抗体竞争ELISA检测试剂盒
商品名称:无
英文名称:CompetitiveELISA Kit for Detecting 3ABC Antibody of FMDV
汉语拼音:Koutiyi 3ABC KangtiJingzhengELISAJianceshijihe
【主要成分与含量】
编号 | 试剂盒组分 | 数量 | 用法 |
1P | 2P | 5P |
FMDV 3ABCC-I | FMDV 3ABCC抗原包被板 | 96孔板×1块 | 96孔板×2块 | 96孔板×5块 | 直接使用 |
FMDV 3ABCC-II | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 12ml×1瓶 | 30ml×1瓶 | 直接使用 |
FMDV 3ABCC-III | FMDV 3ABCC阴性血清 | 300μl×1管 | 500μl×1管 | 1 ml×1管 | 直接使用 |
FMDV 3ABCC-IV | FMDV 3ABCC阳性血清 | 300μl×1管 | 500μl×1管 | 1 ml×1管 | 直接使用 |
WB-V | 洗涤液20× | 30ml×1瓶 | 30ml×1瓶 | 100ml×1瓶 | 20倍稀释后使用 |
FMDV 3ABCC-VI | 酶标抗体 | 5ml×1瓶 | 10ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 直接使用 |
CA-VII | 底物溶液A | 6ml×1瓶 | 12ml×1瓶 | 30ml×1瓶 | 直接使用 |
CB-VIII | 底物溶液B | 6ml×1瓶 | 12ml×1瓶 | 30ml×1瓶 | 直接使用 |
SS-IX | 终止液 | 6ml×1瓶 | 12ml×1瓶 | 30ml×1瓶 | 直接使用 |
【作用与用途】用于检测猪、牛、羊等动物血清或血浆中口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3ABC抗体,用于区分免疫和感染。
【用法与判定】1 用法
1.1 实验准备试剂盒各个组分在使用前均须恢复至室温(20~25℃),加液前充分摇匀。FMDV 3ABCC抗原包被板(I)上FMDV 3ABCC阴性血清(III)、FMDV 3ABCC阳性血清(IV)和样品的分布如图1所示(N-表示加阴性血清,P-表示加阳性血清,S1、S2、S3、S4、S5、S6和其余孔表示加待检血清)。
图1 酶标板上对照和样品添加模式图
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
A | N | S5 |
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B | N | S6 |
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C | P |
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D | P |
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E | S1 |
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F | S2 |
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G | S3 |
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H | S4 |
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注:为保证不同样品的孵育时间一致,可先取待检样品不低于25μl和FMDV 3ABCC阴性血清(III)、FMDV 3ABCC阳性血清(IV)不低于50μl分别加入96孔板(单独准备)中并做好记录,然后用多道移液器移至FMDV 3ABCC抗原包被板(I)相应孔中。也可在FMDV 3ABCC抗原包被板(I)直接加样。
1.2 操作步骤
1.2.1 每孔加入25μl样品稀释液(II),A1、B1、C1、D1孔不加样品稀释液(II);
1.2.2 在A1和B1孔加入FMDV 3ABCC阴性血清(III)各50μl;在C1和D1孔加入FMDV 3ABCC阳性血清(IV)各50μl;剩余孔加入25μl样品用于检测;
1.2.3 每孔加50μl的酶标抗体(VI),此时,反应体系为100μl;
1.2.4 轻轻振匀孔中样品(勿溢出),37℃孵育30分钟;
1.2.5 将洗涤液20×(V)用纯水或去离子水做20倍稀释,即为工作浓度的洗涤液;
1.2.6 甩干FMDV 3ABCC抗原包被板孔中的液体,每孔加入300μl工作浓度的洗涤液,洗涤3次,在洗涤和加入下一个试剂前,避免孔壁变干;
1.2.7 每孔加入50μl底物溶液A(VII),每孔再加入50μl底物溶液B(VIII);
1.2.8 室温下避光孵育10~15分钟;
1.2.9 每孔加入50μl的终止液(IX)终止显色反应;
1.2.10 使用酶标仪测定450nm波长处的OD值。
2结果判定
2.1 FMDV 3ABCC阴性血清(III)的平均OD值即为ODNC;FMDV 3ABCC阳性血清(IV)的平均OD值即ODPC;样品的OD值即为ODS;
2.2 阈值计算:阳性血清抑制率=(ODNC-ODPC)/ODNCx100%
样品抑制率=(ODNC-ODS)/ODNCx100%
2.3试验成立条件:ODNC值>0.6且阳性血清抑制率>60%,试验结果有效;否则重新进行试验。
2.4 判定:样品抑制率>50%判为阳性;样品抑制率≤50%判为阴性。
【注意事项】(1)需自备的试验用器材:96孔板、100μl、200μl的单道或多道微量移液器,吸头,酶标仪,纯水或去离子水。
(2)底物溶液A(VII)和底物溶液B(VIII)避免接触氧化物,出现颜色变化,应弃之不用,底物溶液B(VIII)应避光保存。
(3)终止液(IX)为稀硫酸溶液,若接触到皮肤或眼睛,请及时用大量清水洗涤并就医。
(4)需稀释的组分洗涤液20×(V)在稀释时应准确量取,如果发现有结晶应加热使其溶解后使用。
(5)本试剂盒贮藏时严禁冻结。
【规格】(1)96孔/盒(2)192孔/盒(3)480孔/盒
【贮藏与有效期】 2~8℃保存,有效期12个月。
仅供兽医诊断使用