口蹄疫3ABC抗体竞争ELISA检测试剂盒说明书
兽用
【兽药名称】
通用名称：口蹄疫3ABC抗体竞争ELISA检测试剂盒
商品名称：无
英文名称：Competitive ELISA Kit for Detecting 3ABC Antibody of FMDV
汉语拼音：Koutiyi 3ABC Kangti Jingzheng ELISA Jiance Shijihe
【主要成分与含量】
编号 | 试剂盒组分 | 数量 | 用法 |
1P | 2P | 5P |
FMDV 3ABC C-I | FMDV 3ABC C抗原包被板 | 96孔板×1块 | 96孔板×2块 | 96孔板×5块 | 直接使用 |
FMDV 3ABC C-II | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 12ml×1瓶 | 30ml×1瓶 | 直接使用 |
FMDV 3ABC C-III | FMDV 3ABC阴性血清 | 300μl×1管 | 500μl×1管 | 1 ml×1管 | 直接使用 |
FMDV 3ABC C-IV | FMDV 3ABC阳性血清 | 300μl×1管 | 500μl×1管 | 1 ml×1管 | 直接使用 |
WB-V | 洗涤液20× | 30ml×1瓶 | 30ml×1瓶 | 100ml×1瓶 | 20倍稀释后使用 |
FMDV 3ABC C-VI | 酶标抗体 | 5ml×1瓶 | 10ml×1瓶 | 25ml×1瓶 | 直接使用 |
CA-VII | 底物溶液A | 6ml×1瓶 | 12ml×1瓶 | 30ml×1瓶 | 直接使用 |
CB-VIII | 底物溶液B | 6ml×1瓶 | 12ml×1瓶 | 30ml×1瓶 | 直接使用 |
SS-IX | 终止液 | 6ml×1瓶 | 12ml×1瓶 | 30ml×1瓶 | 直接使用 |
【作用与用途】用于检测猪、牛、羊等动物血清或血浆中口蹄疫病毒（FMDV）非结构蛋白3ABC抗体，用于区分免疫和感染。
【用法与判定】
1、实验准备
1）为保证不同样品的孵育时间一致，可先取待检样品不低于5μl和FMDV 3ABC阴性血清（III）和FMDV 3ABC阳性血清（IV）不低于50μl分别加入96孔板（单独准备）中并做好记录，然后用多道移液器移至FMDV 3ABC C抗原包被板（I）相应孔中。也可在FMDV 3ABC C抗原包被板（I）直接加样。
2）试剂盒各个组分在使用前均须恢复至室温（20~25℃），加液前充分摇匀。
2、操作步骤
FMDV 3ABC C抗原包被板（I）上FMDV 3ABC阴性血清（III）、FMDV 3ABC阳性血清（IV）和样品的分布如上图N、P和S所示。
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
A | N | S5 |
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B | N |
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C | P |
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D | P |
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E | S1 |
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F | S2 |
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G | S3 |
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H | S4 |
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1）每孔加入45μl样品稀释液（II），A1、B1、C1、D1孔不加样品稀释液（II）；
2）在A1和B1孔加入FMDV 3ABC阴性血清（III）各50μl；
3）在C1和D1孔加入FMDV 3ABC阳性血清（IV）各50μl；
4）剩余孔加入5μl样品用于检测；
5）每孔加50μl的酶标抗体（VI），即100μl的反应体系；
6）轻轻振匀孔中样品（勿溢出），37℃孵育30分钟；
7）将洗涤液20×（V）用纯水或去离子水做20倍稀释，即为工作浓度的洗涤液1×；
8）甩干FMDV 3ABC C抗原包被板孔中的液体，每孔加入300μl洗涤液1×，洗涤3次，在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干；
9）每孔加入50μl底物溶液A（VII）；
10）每孔再加入50μl底物溶液B（VIII）；
11）室温下避光孵育10分钟；
12）每孔加入50μl的终止液（IX）终止显色反应；
13）使用酶标仪测定450nm波长处的OD值。
3、结果判定
1）FMDV 3ABC阴性血清（III）的平均OD值即ODNC，应大于0.6，FMDV 3ABC阳性血清（IV）的平均OD值即ODPC，阳性血清抑制率应大于60%，试验结果有效；否则重新进行试验；
2）样品的OD值即ODS；
3）阈值计算：阈值计算： 阳性血清抑制率=(ODNC-ODPC)/ODNC x100%
样品抑制率=(ODNC-ODS)/ODNC x100%
4）样品抑制率＞50%判为阳性；样品抑制率≤50%判为阴性。
【注意事项】
1）需自备的试验用器材：96孔板、100μl、200μl的单道或多道微量移液器，吸头，酶标仪，纯水或去离子水。
2）底物溶液A（VII）和底物溶液B（VIII）避免接触氧化物，出现颜色变化，应弃之不用，底物溶液B（VIII）应避光保存。
3）终止液（IX）为稀硫酸溶液，避免接触氧化物，若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤并就医。
4）需稀释的组分洗涤液20×（V）在稀释时应准确量取，如果发现有结晶应加热使其溶解后使用。
5）在操作过程中，尽量避免将气泡加入检测孔中。
【规格】 （1）96孔/盒 （2）192孔/盒 （3）480孔/盒
【贮藏与有效期】 2~8℃保存，有效期12个月。
【生产企业】
企业名称：青岛立见诊断技术发展中心
企业地址：青岛市城阳区红岛街道岙东南路21号
邮编：266114
电话：0532-87839766
传真：0532-87839766