口蹄疫3ABC抗体竞争ELISA检测试剂盒说明书

兽用

【兽药名称】

通用名称：口蹄疫3ABC抗体竞争ELISA检测试剂盒

商品名称：无

英文名称：CompetitiveELISA Kit for Detecting 3ABC Antibody of FMDV

汉语拼音：Koutiyi 3ABC KangtiJingzhengELISAJianceshijihe

【主要成分与含量】

【作用与用途】用于检测猪、牛、羊等动物血清或血浆中口蹄疫病毒（FMDV）非结构蛋白3ABC抗体，用于区分免疫和感染。

【用法与判定】1 用法

1.1  实验准备试剂盒各个组分在使用前均须恢复至室温（20~25℃），加液前充分摇匀。FMDV 3ABCC抗原包被板（I）上FMDV 3ABCC阴性血清（III）、FMDV 3ABCC阳性血清（IV）和样品的分布如图1所示（N-表示加阴性血清，P-表示加阳性血清，S1、S2、S3、S4、S5、S6和其余孔表示加待检血清）。

图1  酶标板上对照和样品添加模式图

注：为保证不同样品的孵育时间一致，可先取待检样品不低于25μl和FMDV 3ABCC阴性血清（III）、FMDV 3ABCC阳性血清（IV）不低于50μl分别加入96孔板（单独准备）中并做好记录，然后用多道移液器移至FMDV 3ABCC抗原包被板（I）相应孔中。也可在FMDV 3ABCC抗原包被板（I）直接加样。

1.2  操作步骤

1.2.1  每孔加入25μl样品稀释液（II），A1、B1、C1、D1孔不加样品稀释液（II）；

1.2.2  在A1和B1孔加入FMDV 3ABCC阴性血清（III）各50μl；在C1和D1孔加入FMDV 3ABCC阳性血清（IV）各50μl；剩余孔加入25μl样品用于检测；

1.2.3  每孔加50μl的酶标抗体（VI），此时，反应体系为100μl；

1.2.4  轻轻振匀孔中样品（勿溢出），37℃孵育30分钟；

1.2.5  将洗涤液20×（V）用纯水或去离子水做20倍稀释，即为工作浓度的洗涤液；

1.2.6  甩干FMDV 3ABCC抗原包被板孔中的液体，每孔加入300μl工作浓度的洗涤液，洗涤3次，在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干；

1.2.7  每孔加入50μl底物溶液A（VII），每孔再加入50μl底物溶液B（VIII）；

1.2.8  室温下避光孵育10~15分钟；

1.2.9  每孔加入50μl的终止液（IX）终止显色反应；

1.2.10  使用酶标仪测定450nm波长处的OD值。

2结果判定

2.1  FMDV 3ABCC阴性血清（III）的平均OD值即为OD_NC；FMDV 3ABCC阳性血清（IV）的平均OD值即OD_PC；样品的OD值即为OD_S；

2.2  阈值计算：阳性血清抑制率=(OD_NC-OD_PC)/OD_NCx100%

样品抑制率=(OD_NC-OD_S)/OD_NCx100%

2.3试验成立条件：OD_NC值＞0.6且阳性血清抑制率＞60%，试验结果有效；否则重新进行试验。

2.4  判定：样品抑制率＞50%判为阳性；样品抑制率≤50%判为阴性。

【注意事项】（1）需自备的试验用器材：96孔板、100μl、200μl的单道或多道微量移液器，吸头，酶标仪，纯水或去离子水。

（2）底物溶液A（VII）和底物溶液B（VIII）避免接触氧化物，出现颜色变化，应弃之不用，底物溶液B（VIII）应避光保存。

（3）终止液（IX）为稀硫酸溶液，若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤并就医。

（4）需稀释的组分洗涤液20×（V）在稀释时应准确量取，如果发现有结晶应加热使其溶解后使用。

（5）本试剂盒贮藏时严禁冻结。

【规格】（1）96孔/盒（2）192孔/盒（3）480孔/盒

【贮藏与有效期】 2~8℃保存，有效期12个月。

仅供兽医诊断使用