猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书
兽用
【兽药名称】
通用名称:猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒
商品名称:无
英文名称:ELISA Kit for Detecting Antibody of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus
汉语拼音:Zhu Fanzhiyuhuxizonghezheng Bingdu ELISA Kangti Jiance Shijihe
【主要成分与含量】
编号 | 试剂盒组分 | 数量 | 用法 |
1P | 2P | 5P |
PRRSV I-I | PRRSV I抗原包被板 | 96孔板×1块 | 96孔板×2块 | 96孔板×5块 | 直接使用 |
PRRSV I-II | 样品稀释液 | 10ml×1瓶 | 20ml×1瓶 | 50ml×1瓶 | 直接使用 |
PRRSV I-III | PRRSV阴性血清 | 500μl×1管 | 1 ml×1管 | 2 ml×1管 | 直接使用 |
PRRSV I-IV | PRRSV阳性血清 | 500μl×1管 | 1 ml×1管 | 2 ml×1管 | 直接使用 |
WB-V | 洗涤液20× | 30ml×1瓶 | 30ml×2瓶 | 100ml×1瓶 | 20倍稀释后使用 |
PRRSV I-VI | 酶标抗体 | 10ml×1瓶 | 20ml×1瓶 | 50ml×1瓶 | 直接使用 |
CA-VII | 底物溶液A | 6ml×1瓶 | 12ml×1瓶 | 30ml×1瓶 | 直接使用 |
CB-VIII | 底物溶液B | 6ml×1瓶 | 12ml×1瓶 | 30ml×1瓶 | 直接使用 |
SS-IX | 终止液 | 6ml×1瓶 | 12ml×1瓶 | 30ml×1瓶 | 直接使用 |
【作用与用途】用于检测猪血清或血浆中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体。
【用法与判定】
1、实验准备
1)为保证不同样品的孵育时间一致,可先取待检样品不低于10μl和阴性血清(III)、阳性血清(IV)不低于100μl分别加入96孔板(单独准备)中并做好记录,然后用多道移液器移至PRRSV I抗原包被板(I)相应孔中。也可在PRRSV I抗原包被板(I)直接加样。
2)试剂盒各个组分在使用前均须恢复至室温(20~25℃),加液前充分摇匀。
2、操作步骤
PRRSV I抗原包被板(I)上PRRSV阴性血清(III)、PRRSV阳性血清(IV)和样品的分布如图N、P和S所示
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
A | N | S5 |
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B | N |
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C | P |
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D | P |
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E | S1 |
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F | S2 |
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G | S3 |
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H | S4 |
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1)每孔加入100μl样品稀释液(II),A1、B1、C1、D1孔不加样品稀释液(II);
2)在A1和B1孔加入PRRSV阴性血清(III)各100μl;
3)在C1和D1孔加入PRRSV阳性血清(IV)各100μl;
4)剩余孔加入10μl样品用于检测;
5)轻轻振匀孔中样品(勿溢出),37℃孵育30分钟;
6)将洗涤液20×(V)用纯水或去离子水做20倍稀释,即为工作浓度的洗涤液1×;
7)甩干PRRSV I抗原包被板孔中的液体,每孔加入300μl洗涤液1×,洗涤3次,在洗涤和加入下一个试剂前,避免孔壁变干;
8)每孔加入100μl的酶标抗体(VI);
9)37℃孵育30分钟;
10)甩干PRRSV I抗原包被板孔中的液体,每孔加入300μl洗涤液1×,洗涤3次,在洗涤和加入下一个试剂前,避免孔壁变干;
11)每孔加入50μl底物溶液A(VII);
12)每孔再加入50μl底物溶液B(VIII);
13)37℃避光孵育10分钟;
14)每孔加入50μl的终止液(IX)终止显色反应;
15)使用酶标仪测定450nm波长处的OD值。
3、结果判定
1)PRRSV阴性血清(III)的平均OD值即ODNC应≤0.3,PCV2阳性血清(IV)的平均OD值即ODPC应≥0.6,试验结果有效;否则重新进行试验;
2)阈值计算(Cut Off值):Cut Off值=ODNC×2.1(若ODNC≥0.05则按实际值计算;若ODNC<0.05则按0.05计算);
3)样品的OD值即ODS;
4)ODS<Cut Off值,结果判为阴性;ODS ≥Cut Off值,结果判为阳性。
【注意事项】
1)需自备的试验用器材:96孔板、100μl、200μl的单道或多道微量移液器,吸头,酶标仪,纯水或去离子水。
2)底物溶液A(VII)和底物溶液B(VIII)避免接触氧化物,出现颜色变化,应弃之不用,底物溶液B(VIII)应避光保存。
3)终止液(IX)为稀硫酸溶液,避免接触氧化物,若接触到皮肤或眼睛,请及时用大量清水洗涤并就医。
4)需稀释的组分洗涤液20×(V)在稀释时应准确量取,如果发现有结晶应加热使其溶解后使用。
5)在操作过程中,尽量避免将气泡加入检测孔中。
【规格】 (1)96孔/盒 (2)192孔/盒 (3)480孔/盒
【贮藏与有效期】 2~8℃保存,有效期12个月。
【生产企业】
企业名称:青岛立见诊断技术发展中心
企业地址:青岛市城阳区红岛街道岙东南路21号
邮编:266114
电话:0532-87839766
传真:0532-87839766