非洲猪瘟病毒荧光 PCR 检测试剂盒（一步法）说明书 

批准文号：154028911 兽用 

【兽药名称】 通用名 非洲猪瘟病毒荧光 PCR 检测试剂盒（一步法） 商品名 无 英文名 African Swine Fever Virus Real-time PCR Test Kit（One-step） 汉语拼音 Feizhouzhuwenbingdu Yingguang PCR Jiance Shijihe（Yibufa）

【主要成分与含量】 编号 试剂盒组分 装量 用法 ASFV 01-qf50 缓冲液 B1 5ml/瓶 直接使用 ASFV 02-qf50 缓冲液 B2 5ml/瓶 直接使用 ASFV 03-qf50 PCR 反应液 900μl/管 直接使用 ASFV 04-qf50 阳性对照 1ml /管 直接使用 ASFV 05-qf50 阴性对照 1ml /管 直接使用 

【作用与用途】 用于全血、血清、血浆、淋巴结、脾脏、肾脏、扁桃体和肌肉等样品中的非 洲猪瘟病毒核酸的检测。 

【用法与判定】 1 用法 1.1 样品处理 1.1.1 全血、血清、血浆直接进行下一步试验。淋巴结、脾脏、肾脏、扁桃体、肌肉等组 织样品取 0.1～0.2g，置研钵充分研磨，加入 10 倍体积约 1～2ml 生理盐水，混匀；或置研磨 管中，加入 10 倍体积约 1～2ml 生理盐水及研磨珠，用组织研磨仪匀浆。以 5000 转/分钟离心 5 分钟，留上清，即为组织匀浆液。 1.1.2 取 1.5ml 离心管加入 100μl 缓冲液 B1，每管分别加入 10μl 全血（EDTA 抗凝剂） 或 20μl 组织匀浆液、血清、血浆样品、阳性对照和阴性对照混匀。室温 3 分钟内涡旋混匀 3～ 5 次。 1.1.3 每管加入 100μl 缓冲液 B2，涡旋混匀，12000 转/分钟离心 1 分钟，上清为待检核酸。 1.2 扩增试剂准备 取 18μl PCR 反应液至 PCR 反应管；依次分别加入 2μl 阴性对照、 样品和阳性对照待检核酸，盖紧管盖，每个反应管内反应体积为 20μl。

网址：www.qdregen.com 电话：0532-87839766 邮箱：qdlijian2003@163.com 1.3 将 PCR 反应管瞬时离心，置荧光 PCR 仪内，进行如下反应： 1）95℃预变性 20 秒；2）95℃变性 10 秒，58℃延伸 20 秒，共 40 个循环；设置 58℃收 集 FAM 荧光信号。 2 判定 2.1 试验成立条件 阳性对照 Ct 值应＜35 且出现特异性扩增曲线，阴性对照应无 Ct 值或 Ct 值≥40 且无特 异性扩增曲线，试验结果有效；否则应重新进行试验。 2.2 结果判定 样品 Ct 值≤37 且出现特异性扩增曲线，判为阳性；无 Ct 值且无特异性扩增曲线，判为 阴性；当 37＜Ct 值＜40 时判为可疑，应重新提取样品核酸进行检测，若 Ct 值仍＜40，则判 为阳性，若无 Ct 值且无特异性扩增曲线，判为阴性。 

【注意事项】 （1）使用本试剂盒的实验室应严格按照国家有关规定进行管理。 （2）PCR 反应液对温度敏感容易失活，使用时应置于冰上，使用后应立即冻存，每盒反 应液冻融次数不宜超过 3 次。 （3）缓冲液 B1、B2 使用前融化恢复至室温并充分摇匀，融化恢复至室温的缓冲液 B1、 B2 可室温保存。 （4）扩增试剂准备时应按阴性对照、待检核酸、阳性对照的顺序加入 PCR 反应管中。 （5）吸取反应液时，应避免产生气泡；加样结束后应盖紧管盖，以免液体蒸发。 （6）处理样品用器械及废弃物品应高压灭菌。检测过程中使用过的吸头，应直接打到盛 有 10% 84 消毒液的带盖废物缸内。检测结束的 PCR 反应管，严禁开盖不得高压处理。 （7）工作台及各种实验用品应定期清洁并用 10% 84 消毒液或紫外灯进行防污染处理。 （8）各区域物品均为专用，不得交叉使用，以免污染。检测结束后，应立即对工作台进 行清洁。 （9）严禁使用超过有效期限的试剂；不同批号的试剂请勿混用。 

【规格】 （1）10 检份/盒 （2）25 检份/盒 （3）50 检份/盒 （4）100 检份/盒 

【贮藏与有效期】 -20℃以下冷冻保存，有效期 12 个月。 

仅供兽医诊断使用