伪狂犬病毒荧光PCR检测试剂盒说明书
兽用
【兽药名称】
通用名称 伪狂犬病毒荧光PCR检测试剂盒
商品名称 无
英文名称 Pseudo Rabies Virus Real-time PCR Test Kit
汉语拼音 Weikuangquanbingdu Yingguang PCR Jianceshijihe
【主要成分与含量】
编号 | 试剂盒组分 | 装量 |
PRV 01-q50 | 荧光PCR反应液 | 1000μl/管 |
PRV 02-q50 | 阳性对照 | 500µl/管 |
NC | 阴性对照 | 500μl/管 |
【作用与用途】 用于动物肺、扁桃体、淋巴结等组织病料和血液、鼻腔拭子等液体病料中的伪狂犬病毒(PRV)核酸检测。
【用法与判定】
1 用法
1.1 样品处理
样品参照《伪狂犬病诊断技术》(GB/T 18641-2002)(www.qdregen.com下载中心)进行处理。使用核酸提取试剂盒则参照说明书处理样品。阳性对照及阴性对照无需提取核酸,直接使用。
1.2 荧光PCR反应体系的配制 每个反应体系25μl。在每个PCR反应管中依次加入20 μl 荧光PCR反应液,然后取5μl阴性对照、再取5μl PCR待检核酸、最后取5μl阳性对照分别加到不同的PCR反应管中,加样结束后应盖紧反应管,标记并做好记录。
1.3 荧光PCR反应 加样后将PCR反应管瞬时离心,然后置于荧光PCR仪内,进行如下反应:
1) 95ºC预变性30秒;2) 95ºC变性10秒,60ºC延伸20秒,共45个循环;设置60ºC收集FAM荧光信号。
2 判定
2.1 结果的有效性 阳性对照应出现特异性扩增曲线且Ct值≤35,且阴性对照无特异性扩增曲线或无Ct值,则试验成立;否则试验不成立。
结果判定 当样品的扩增结果有典型的扩增曲线且Ct值≤35时可判定为伪狂犬病毒核酸阳性,Ct值>37或无Ct值时可判定为伪狂犬病毒核酸阴性;当样品35<Ct值≤37时判定为伪狂犬病毒核酸可疑,需重新提取核酸,重复检测仍为可疑则判定为伪狂犬病毒核酸阳性。
【注意事项】
(1) 使用本试剂盒的实验室应严格按照国家有关规定进行管理。
(2) 荧光PCR反应液对温度敏感容易失活,使用时应置于冰上,使用后应立即冻存,冻融次数不宜超过3次。
(3) 扩增试剂准备时应按阴性对照、待检核酸、阳性对照的顺序加入PCR反应管中。
(4) 吸取反应液时,应尽量避免产生气泡;加样结束后应盖紧反应管,以免液体蒸发造成结果不准确。
(5) 处理样品用器械及废弃物品应高压灭菌。检测过程中使用过的吸头,应直接打到盛有10% 84消毒液的带盖废物缸内。检测结束的PCR反应管,严禁开盖不得高压处理。
(6) 工作台及各种实验用品应定期清洁并用10% 84消毒液或紫外灯进行防污染处理。
(7) 各区域物品均为专用,不得交叉使用,以免污染。检测结束后,应立即对工作台进行清洁。
(8) 严禁使用超过有效期限的试剂;不同批号的试剂请勿混用。
【规格】 50检份/盒
【贮藏与有效期】 -20℃以下冷冻保存,有效期12个月。
仅供兽医诊断使用