伪狂犬病毒荧光PCR检测试剂盒说明书

兽用

【兽药名称】

通用名称  伪狂犬病毒荧光PCR检测试剂盒

商品名称  无

英文名称 Pseudo Rabies Virus Real-time PCR Test Kit

汉语拼音  Weikuangquanbingdu Yingguang PCR Jianceshijihe

【主要成分与含量】

【作用与用途】  用于动物肺、扁桃体、淋巴结等组织病料和血液、鼻腔拭子等液体病料中的伪狂犬病毒（PRV）核酸检测。

【用法与判定】

1 用法

1.1 样品处理

样品参照《伪狂犬病诊断技术》（GB/T 18641-2002）（www.qdregen.com下载中心）进行处理。使用核酸提取试剂盒则参照说明书处理样品。阳性对照及阴性对照无需提取核酸，直接使用。

1.2 荧光PCR反应体系的配制  每个反应体系25μl。在每个PCR反应管中依次加入20 μl 荧光PCR反应液，然后取5μl阴性对照、再取5μl PCR待检核酸、最后取5μl阳性对照分别加到不同的PCR反应管中，加样结束后应盖紧反应管，标记并做好记录。

1.3 荧光PCR反应  加样后将PCR反应管瞬时离心，然后置于荧光PCR仪内，进行如下反应：

1） 95ºC预变性30秒；2） 95ºC变性10秒，60ºC延伸20秒，共45个循环；设置60ºC收集FAM荧光信号。

2 判定

2.1 结果的有效性  阳性对照应出现特异性扩增曲线且Ct值≤35，且阴性对照无特异性扩增曲线或无Ct值，则试验成立；否则试验不成立。

结果判定  当样品的扩增结果有典型的扩增曲线且Ct值≤35时可判定为伪狂犬病毒核酸阳性，Ct值＞37或无Ct值时可判定为伪狂犬病毒核酸阴性；当样品35＜Ct值≤37时判定为伪狂犬病毒核酸可疑，需重新提取核酸，重复检测仍为可疑则判定为伪狂犬病毒核酸阳性。

【注意事项】

（1） 使用本试剂盒的实验室应严格按照国家有关规定进行管理。

（2） 荧光PCR反应液对温度敏感容易失活，使用时应置于冰上，使用后应立即冻存，冻融次数不宜超过3次。

（3） 扩增试剂准备时应按阴性对照、待检核酸、阳性对照的顺序加入PCR反应管中。

（4） 吸取反应液时，应尽量避免产生气泡；加样结束后应盖紧反应管，以免液体蒸发造成结果不准确。

（5） 处理样品用器械及废弃物品应高压灭菌。检测过程中使用过的吸头，应直接打到盛有10% 84消毒液的带盖废物缸内。检测结束的PCR反应管，严禁开盖不得高压处理。

（6） 工作台及各种实验用品应定期清洁并用10% 84消毒液或紫外灯进行防污染处理。

（7） 各区域物品均为专用，不得交叉使用，以免污染。检测结束后，应立即对工作台进行清洁。

（8） 严禁使用超过有效期限的试剂；不同批号的试剂请勿混用。

【规格】  50检份/盒

【贮藏与有效期】  -20℃以下冷冻保存，有效期12个月。

仅供兽医诊断使用