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小反刍兽疫病毒RT-PCR检测试剂盒

上市日期: 2017-06-29

小反刍兽疫病毒RT-PCR检测试剂盒说明书

(50头份)

 

组分与用法

编号

名称

装量

用法

保存条件

1

反应阳性对照品

30 μl/ ×1

直接使用

-20°C保存

2

RT-PCR反应液

1050 μl/ ×1

直接使用

-20°C保存

3

酶混合液

50μl/ ×1

直接使用

-20°C保存

未提供但是需要准备的试剂和耗材

RNase的纯水,购买或自己制备。

RNase/DNasePCR反应管、Tips1.5 ml离心管等

作用与用途用于检测各种临床样本(如鼻腔/口腔拭子、眼拭子、淋巴结、脾、肾、直肠、结肠、肺等)中是否含小反刍兽疫病毒核酸。

用法与判定

样本处理  可采用RocheQIAGEN等公司生产的手工RNA纯化试剂盒或其他全自动核酸提取仪提取各类样本中的RNA。如在2小时内检测则提取的RNA置于冰上保存,否则置于﹣80ºC冰箱保存。

扩增试剂准备  配制反应体系前,务必使RT-PCR反应液完全溶解,并颠倒混匀几次,然后瞬时离心。每份被检样品使用1PCR管,每管中依次加入:RT-PCR反应液21μl,酶混合液1μl,被检样品中提取的RNA溶液 3μl

每次检测设置标准阳性对照和标准阴性对照(加3μl)。标准阳性对照用反应阳性对照品作为模板,而标准阴性对照用无RNase的纯水作为模板。

3  RT-PCR反应  加样后,将PCR管置于PCR仪内进行如下反应:50ºC,反转录30 min;然后94ºC, 2 min进行Taq酶的激活;接着进行35个循环的PCR扩增(扩增条件为94ºC, 20 sec58ºC, 30 sec72ºC, 30 sec);最后进行72ºC, 7 min的延伸。

4  RT-PCR产物的电泳  RT-PCR反应结束后,取RT-PCR产物5 μl1.5%琼脂糖凝胶中电泳30 min。电泳结束后,将琼脂糖凝胶置于凝胶成像系统中拍照。

结果判定  实验结果成立的条件:阳性对照应出现350 bp大小的特异性条带,阴性对照无350bp大小的特异性条带。

如果待测样品出现与阳性对照大小一致的扩增条带(大小约为350 bp),则结果判为小反刍兽疫病毒核酸普通RT-PCR阳性,否则结果判为小反刍兽疫病毒核酸普通RT-PCR阴性。

 

 

注意事项

使用本品的实验室,应严格按照国家有关部分颁布的有关基因扩增检验的实验室管理规范进行管理。

各区域物品均为专用,不得交叉使用,以免污染。检测结束后,应立即对工作台进行清洁。

吸取反应液时,应尽量避免产生气泡。上PCR仪前,应注意检查各反应管是否盖紧,以免液体蒸发造成结果不准确。

检测过程中使用过的吸头,应直接打到盛有10%次氯酸的废物缸内,并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃。

工作台及各种实验用品应定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外灯进行消毒。

由于PPRVRNA病毒,因此,在提取过程中应特别注意防止RNA的降解作用,如离心管、吸头等,都必须购买无RNA酶污染级别的。

酶混合物容易失活,实验前才能从-20°C取出,使用时应置于冰上,使用后应立即放回冰箱冻存。

8 不同批号的试剂请勿混用,在有效期内使用。

 

贮藏 各组分应冻存于-20ºC,避免反复冻融。


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