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产品名称:

小反刍兽疫病毒RT-PCR检测试剂盒

上市日期: 2017-06-29

小反刍兽疫病毒RT-PCR检测试剂盒说明书

兽用

【兽药名称】

通用名  小反刍兽疫病毒RT-PCR检测试剂盒

商品名  

英文名  Peste Des Petits Ruminants Virus RT-PCR Detection Kit

汉语拼音  Xiaofanchushouyibingdu RT-PCR Jianceshijihe

主要成分与含量

编号

试剂盒组分

装量

用法

PPRV 01-R50

RT-PCR反应液

1050 μl/管×1

直接使用

PPRV 02-R50

酶混合液

  50 μl/管×1

直接使用

PPRV 03-R50

阳性对照

  100μl/管×1

直接使用

PPRV 04-R50

阴性对照

 1000μl/管×1

直接使用

作用与用途  用于鼻腔拭子、口腔拭子、眼拭子以及淋巴结、脾、肾、直肠、结肠、肺等组织等样品中小反刍兽疫病毒(PPRV)核酸的检测。

用法与判定

1        用法

1.1  样品处理

采用RNA纯化试剂盒或自动核酸提取仪提取各类样品中的待检RNA核酸,低温保存。

1.2  扩增试剂准备  根据检测样品数量每个反应管加入21 μl RT-PCR反应液,1μl酶混合液后;先取3 μl阴性对照、再取3 μl待检DNA核酸、最后取3 μl阳性对照分别加到不同的PCR反应管中,加样结束后应盖紧反应管,每个反应管内液体的体积为25 μl

1.3 PCR反应  加样后将PCR反应管瞬时离心,然后置于PCR仪内,进行如下反应:

150ºC反转录30分钟;294ºC预变性2分钟;394ºC变性20秒,58℃退火30秒,72℃延伸30秒,共35个循环;472℃延伸7分钟。

1.4 RT-PCR产物的电泳  RT-PCR反应结束后,取RT-PCR产物5 μl1.5%琼脂糖凝胶中电泳30 min。电泳结束后,将琼脂糖凝胶置于凝胶成像系统中拍照。

2 判定

结果的有效性  阳性对照应出现350 bp大小的特异性条带,且阴性对照无350bp大小的特异性条带,则试验成立;否则试验不成立。

结果判定  当待测样品出现与阳性对照大小一致的扩增条带(大小约为350 bp),则结果判为小反刍兽疫病毒核酸普通RT-PCR阳性,否则结果判为小反刍兽疫病毒核酸普通RT-PCR阴性。

注意事项

1 使用本试剂盒的实验室应严格按照国家有关规定进行管理。

2 RT-PCR反应液对温度敏感容易失活,使用时应置于冰上,使用后应立即冻存,每盒反应液冻融次数不宜超过3次。

3 扩增试剂准备时应按阴性对照、待检核酸、阳性对照的顺序加入PCR反应管中。

4 吸取反应液时,应尽量避免产生气泡;加样结束后应盖紧反应管,以免液体蒸发造成结果不准确。

5 处理样品用器械及废弃物品应高压灭菌。检测过程中使用过的吸头,应直接打到盛有10% 84消毒液的带盖废物缸内。检测结束的PCR反应管,严禁开盖不得高压处理。

6 工作台及各种实验用品应定期清洁并用10% 84消毒液或紫外灯进行防污染处理。

7 各区域物品均为专用,不得交叉使用,以免污染。检测结束后,应立即对工作台进行清洁。

8 严禁使用超过有效期限的试剂;不同批号的试剂请勿混用。

【规格】  150检份/

【贮藏与有效期】  -20℃以下冷冻保存,有效期12个月。

 

 

 

 

 

仅供兽医诊断使用

 


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