反刍兽疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒说明书

兽用

【兽药名称】

通用名  小反刍兽疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒

商品名  无

英文名  Peste Des Petits Ruminants Virus Real-time RT-PCR Detection Kit

汉语拼音  Xiaofanchushouyibingdu Yingguang RT-PCR Jianceshijihe

【主要成分与含量】

【作用与用途】  用于鼻腔拭子、口腔拭子、眼拭子以及淋巴结、脾、肾、直肠、结肠、肺等组织等样品中小反刍兽疫病毒（PPRV）核酸的检测。

【用法与判定】

1 用法

1.1 样品处理

采用RNA提取试剂盒或自动核酸提取仪提取各类样品中的待检RNA，低温保存。

1.2 扩增试剂准备

1.2.1 将引物探针（棕色管）和RT-PCR酶反应液瞬时离心后，将RT-PCR酶反应液全部移至引物探针（棕色管）中，颠倒混匀6次，充分混匀，配制成RT-PCR反应液。

1.2.2 根据检测样品数量每个PCR反应管加入20 μl RT-PCR反应液；先取5 μl阴性对照、再取5 μl待检RNA、最后取5 μl阳性对照（充分混匀）分别加到不同的PCR反应管中，加样结束后应盖紧PCR反应管，每个PCR反应管内液体的体积为25 μl。

1.3 荧光RT-PCR反应  加样后将PCR反应管瞬时离心，然后置于荧光PCR仪内，进行如下反应：

1）50ºC反转录15分钟；2）95ºC预变性3分钟；3）94ºC变性15秒，60℃延伸45秒，共40个循环；设置60ºC收集FAM荧光信号。

2 判定

结果的有效性  阳性对照应出现特异性扩增曲线且Ct值＜35，且阴性对照无特异性扩增曲线或无Ct值，则试验成立；否则试验不成立。

结果判定  当样品的扩增结果有典型的扩增曲线且Ct值≤40时可判定为小反刍兽疫病毒核酸阳性，Ct值＞40或无Ct值时可判定为小反刍兽疫病毒核酸阴性。

【注意事项】

（1） 使用本试剂盒的实验室应严格按照国家有关规定进行管理。

（2） RT-PCR酶反应液、引物探针配制成的RT-PCR反应液对温度敏感容易失活，使用时应置于冰上，使用后应立即冻存，冻融次数不宜超过3次。

（3） 扩增试剂准备时应按阴性对照、待检核酸、阳性对照的顺序加入PCR反应管中。

（4） 吸取反应液时，应尽量避免产生气泡；加样结束后应盖紧反应管，以免液体蒸发造成结果不准确。

（5） 处理样品用器械及废弃物品应高压灭菌。检测过程中使用过的吸头，应直接打到盛有10% 84消毒液的带盖废物缸内。检测结束的PCR反应管，严禁开盖不得高压处理。

（6） 工作台及各种实验用品应定期清洁并用10% 84消毒液或紫外灯进行防污染处理。

（7） 各区域物品均为专用，不得交叉使用，以免污染。检测结束后，应立即对工作台进行清洁。

（8） 严禁使用超过有效期限的试剂；不同批号的试剂请勿混用。

（9） 使用ABI系列荧光定量PCR仪时请将仪器参数“Passive Reference”设置为“None”。

【规格】  （1）50检份/盒

【贮藏与有效期】  -20℃以下冷冻保存，有效期15个月。

仅供兽医诊断使用