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小反刍兽疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒

上市日期: 2017-06-14

  用于鼻腔拭子、口腔拭子、眼拭子以及淋巴结、脾、肾、直肠、结肠、肺等组织等样品中小反刍兽疫病毒(PPRV)核酸的检测。

反刍兽疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒说明书

兽用

【兽药名称】

通用名  小反刍兽疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒

商品名  

英文名  Peste Des Petits Ruminants Virus Real-time RT-PCR Detection Kit

汉语拼音  Xiaofanchushouyibingdu Yingguang RT-PCR Jianceshijihe

【主要成分与含量】

编号

试剂盒组分

装量

E 01-qR50

RTPCR酶反应液

100μl/

PPRV 02-qR50

引物探针

900μl/

PPRV 03-qR50

阳性对照

500µl/

NC

阴性对照

500μl/

【作用与用途】  用于鼻腔拭子、口腔拭子、眼拭子以及淋巴结、脾、肾、直肠、结肠、肺等组织等样品中小反刍兽疫病毒(PPRV)核酸的检测。

【用法与判定】

1 用法

1.1 样品处理

采用RNA提取试剂盒或自动核酸提取仪提取各类样品中的待检RNA,低温保存。

1.2 扩增试剂准备

1.2.1 将引物探针(棕色管)和RT-PCR酶反应液瞬时离心后,将RT-PCR酶反应液全部移至引物探针(棕色管)中,颠倒混匀6次,充分混匀,配制成RT-PCR反应液。

1.2.2 根据检测样品数量每个PCR反应管加入20 μl RT-PCR反应液;先取5 μl阴性对照、再取5 μl待检RNA、最后取5 μl阳性对照(充分混匀)分别加到不同的PCR反应管中,加样结束后应盖紧PCR反应管,每个PCR反应管内液体的体积为25 μl

1.3 荧光RT-PCR反应  加样后将PCR反应管瞬时离心,然后置于荧光PCR仪内,进行如下反应:

150ºC反转录15分钟;295ºC预变性3分钟;394ºC变性15秒,60℃延伸45秒,共40个循环;设置60ºC收集FAM荧光信号。

2 判定

结果的有效性  阳性对照应出现特异性扩增曲线且Ct值<35,且阴性对照无特异性扩增曲线或无Ct值,则试验成立;否则试验不成立。

结果判定  当样品的扩增结果有典型的扩增曲线且Ct值≤40时可判定为小反刍兽疫病毒核酸阳性,Ct值>40或无Ct时可判定为小反刍兽疫病毒核酸阴性。

【注意事项】

1 使用本试剂盒的实验室应严格按照国家有关规定进行管理。

2 RT-PCR酶反应液、引物探针配制成的RT-PCR反应液对温度敏感容易失活,使用时应置于冰上,使用后应立即冻存,冻融次数不宜超过3次。

3 扩增试剂准备时应按阴性对照、待检核酸、阳性对照的顺序加入PCR反应管中。

4 吸取反应液时,应尽量避免产生气泡;加样结束后应盖紧反应管,以免液体蒸发造成结果不准确。

5 处理样品用器械及废弃物品应高压灭菌。检测过程中使用过的吸头,应直接打到盛有10% 84消毒液的带盖废物缸内。检测结束的PCR反应管,严禁开盖不得高压处理。

6 工作台及各种实验用品应定期清洁并用10% 84消毒液或紫外灯进行防污染处理。

7 各区域物品均为专用,不得交叉使用,以免污染。检测结束后,应立即对工作台进行清洁。

8 严禁使用超过有效期限的试剂;不同批号的试剂请勿混用。

9 使用ABI系列荧光定量PCR仪时请将仪器参数“Passive Reference”设置为“None”。

【规格】  150检份/

【贮藏与有效期】  -20℃以下冷冻保存,有效期15个月。

 

 

 

 

 

仅供兽医诊断使用

 


 


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