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禽流感病毒H5亚型荧光RT-PCR检测试剂盒

上市日期: 2017-06-14

  用于禽类咽喉拭子、泄殖腔拭子、血清及组织样品中禽流感病毒H5亚型(AIVH5)核酸检测。


 

禽流感病毒H5亚型荧光RT-PCR检测试剂盒说明书

兽用

【兽药名称】

通用名称禽流感病毒H5亚型荧光RT-PCR检测试剂盒

商品名称无

英文名称Avian Influenza Virus H5 Subtype Real-time PCRTest Kit

汉语拼音QinliuganbingduH5YaxingYingguangRT-PCR Jianceshijihe

【主要成分与含量】

编号

试剂盒组分

装量

AIVH5 01-qR50

荧光RT-PCR反应液

900μl/

AIVH5 02-qR50

RT-PCR酶混合液

100μl/

AIVH5 03-qR50

阳性对照

500µl/

NC

阴性对照

500μl/

【作用与用途】用于禽类咽喉拭子、泄殖腔拭子、血清及组织样品中禽流感病毒H5亚型(AIVH5)核酸检测。

【用法与判定】

1 用法

1.1 样品处理

样品参照《禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》(GB/T 19438.1-2004)(www.qdregen.com下载中心)进行处理。使用核酸提取试剂盒则参照说明书处理样品。阳性对照及阴性对照无需提取核酸,直接使用。

1.2荧光RT-PCR反应体系的配制每个反应体系25μl。在每个PCR反应管中依次加入18μl荧光RT-PCR反应液2μlRT-PCR酶混合液,然后取5μl阴性对照、再取5μl PCR待检核酸、最后取5μl阳性对照分别加到不同的PCR反应管中,加样结束后应盖紧反应管,标记并做好记录。

1.3荧光RT-PCR反应加样后将PCR反应管瞬时离心,然后置于荧光PCR仪内,进行如下反应:

150ºC反转录15分钟;2 95ºC预变性30秒;3 95ºC变性10秒,60ºC延伸20秒,共45个循环;设置60ºC收集FAM荧光信号。

2 判定

2.1 结果的有效性阳性对照应出现特异性扩增曲线且Ct值≤35,且阴性对照无特异性扩增曲线或无Ct值,则试验成立;否则试验不成立。

2.2 结果判定当样品的扩增结果有典型的扩增曲线且Ct值≤35时可判定为禽流感病毒H5亚型核酸阳性,Ct值>37或无Ct值时可判定为禽流感病毒H5亚型核酸阴性;当样品35Ct值≤37时判定为禽流感病毒H5亚型核酸可疑,需重新提取核酸,重复检测仍为可疑则判定为禽流感病毒H5亚型核酸阳性。

【注意事项】

1)使用本试剂盒的实验室应严格按照国家有关规定进行管理。

2荧光RT-PCR反应液、RT-PCR酶混合液对温度敏感容易失活,使用时应置于冰上,使用后应立即冻存,冻融次数不宜超过3次。

3)扩增试剂准备时应按阴性对照、待检核酸、阳性对照的顺序加入PCR反应管中。

4)吸取反应液时,应尽量避免产生气泡;加样结束后应盖紧反应管,以免液体蒸发造成结果不准确。

5)处理样品用器械及废弃物品应高压灭菌。检测过程中使用过的吸头,应直接打到盛有10% 84消毒液的带盖废物缸内。检测结束的PCR反应管,严禁开盖不得高压处理。

6)工作台及各种实验用品应定期清洁并用10% 84消毒液或紫外灯进行防污染处理。

7)各区域物品均为专用,不得交叉使用,以免污染。检测结束后,应立即对工作台进行清洁。

8)严禁使用超过有效期限的试剂;不同批号的试剂请勿混用。

【规格】50检份/

【贮藏与有效期】-20℃以下冷冻保存,有效期12个月。

 

 

 

 

 

仅供兽医诊断使用


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