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口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒

上市日期: 2017-06-14

本试剂盒适用于动物肺、扁桃体、淋巴结和脾脏等组织病料和血液等液体病料中口蹄疫病毒(FMDV)核酸检测。

 

口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒说明书

兽用

本试剂盒适用于动物肺、扁桃体、淋巴结和脾脏等组织病料和血液等液体病料中口蹄疫病毒(FMDV)核酸检测。

编号

名称

装量

编号

名称

装量

FMDV 01-q48

FMDV qRT-PCR mix

48/

FMDV 03-q48

阳性对照

20µlx8/

FMDV 02-q48

FMDV qRT-PCR Buffer

1000μl

FMDV 04-q48

阴性对照

1000μl

【保存期】  -20℃冷冻保存,有效期12个月。

【规格】 48检份/

【使用方法】

1样品采集、处理和病毒核酸提取

样品参照《口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测方法》(GB/T 22915-2008)(www.qdregen.com下载中心)进行处理。使用核酸提取试剂盒则参照说明书处理样品。阳性对照在每个薄壁PCR反应管中加入20μl qRT-PCR Buffer复溶后直接使用,阴性对照与样品同步同样进行处理。

2qRT-PCR反应体系的配制

每个反应体系20μl。在每个薄壁PCR反应管中加入18μl FMDV qRT-PCR Buffer进行复溶,然后加入2μl样品RNA、阳性对照和阴性对照RNA,标记并做好记录。

3qRT-PCR反应程序的设置

148 10 min294 3 min394 10s60 30s,共40个循环;设置60℃收集FAM荧光信号

【结果判定】

1)阳性对照的Ct值小于等于28.0,同时阴性对照无Ct值且无扩增曲线,实验结果成立。

2)被检样品Ct值小于等于30.0,且出现扩增曲线,为口蹄疫病毒核酸阳性;被检样品Ct值大于等于40.0,判定为阴性;被检样品Ct值大于30.0小于40.0为可疑,需重新提取核酸重复检测仍为可疑则判定为阳性。

【注意事项】

1、本试剂盒说明书未单独说明的事项,均参照《口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测方法》(GB/T 22915-2008)。

2PCR实验室应按功能分为配液区、样品处理区、扩增区、电泳区。物流方向依次为配液区样品处理区扩增区电泳区。所有接触病料的物品、器具,尤其是PCR产物和使用后的电泳缓冲液均应合理处置,以免污染实验室。

3、所有试剂应在规定条件下储存。-20℃保存的试剂在使用前应完全融化,振荡混匀后,置冰盒中取用。使用后如短期内(1个月内)继续使用可以存放4℃;长期保存放置-20℃;尽量避免反复冻融,反复冻融试剂将减低检测灵敏度;严禁使用超过有效期限的试剂;严禁混用不同试剂盒组分。

4、严格按照国标和说明书要求操作。正确使用移液器,吸取液体时吸头尽量在液体上层吸取;做到移液量精准;吸取不同液体时必须更换移液器吸头,防止试剂组分污染以及样品污染。

5、试剂盒组分在生产分装时考虑到液体的损耗,实际装量略多于标注装量,因此严禁直接在原包装中配制反应体系,以免造成反应体系各组分比例不准确。

6、每次检测试验必须设阳性对照和阴性对照,而且阳性对照和阴性对照必须与待检样品同步处理,以验证提取试剂的提取效率以及是否被污染;验证qPCR反应体系的扩增效率以及是否被污染;验证试验中所用器材是否被污染。

7、试验操作过程中,操作人员做好个人安全防护,避免直接接触试剂组分,建议试验全程佩戴一次性手套。

8、需要自备的仪器:超净工作台、离心机、掌型离心机、qPCR扩增仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像仪、4℃冰箱、-20℃冰柜、可调移液器(20μl200μl1000μl)。

9、需要自备的耗材和溶液:1.5ml/2ml RNase-free离心管、琼脂糖、TAE电泳缓冲液、蒸馏水、500ml量筒、吸头(10μl/200μl/1000μl)、一次性PE手套或者乳胶手套、油性记号笔。


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