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非洲猪瘟病毒荧光定量PCR快速检测试剂盒(2.0)

上市日期: 2019-12-23

非洲猪瘟病毒荧光定量PCR快速检测试剂盒说明书

2.0

兽用

【兽药名称】

通用名称:非洲猪瘟病毒荧光定量PCR快速检测试剂盒(2.0

商品名称:无

英文名称:African swine fever virus Real-time PCR rapid test kit2.0

汉语拼音:Feizhouzhuwen Bingdu Yingguangdingliang PCR Kuaisu Jiance Shijihe2.0

【主要成分与含量】

编号

试剂盒组分

装量

E 01-q 50

酶反应液

1000μl/

ASFV 02-q2.0 50

引物探针

1

ASFV -qPC 50

阳性对照

500μl/

NC

阴性对照

500μl/

【作用与用途】  用于猪血液、脾脏、淋巴结、肾脏组织样品中的非洲猪瘟病毒核酸的检测。

【用法与判定】  1 用法

1.1 样品处理

采用DNA提取试剂盒或自动核酸提取仪提取各类样品中的待检DNA,低温保存。

1.2 扩增试剂准备 

1.2.1 将引物探针(棕色管)和酶反应液瞬时离心后,将酶反应液全部移至引物探针(棕色管)中,颠倒混匀6次,充分混匀,配制成PCR反应液。

1.2.2 根据检测样品数量每个PCR反应管加入20 μl PCR反应液;先取5 μl阴性对照、再取5 μl待检DNA、最后取5 μl阳性对照(充分混匀)分别加到不同的PCR反应管中,加样结束后应盖紧PCR反应管,每个PCR反应管内液体的体积为25 μl

1.3 PCR反应  加样后将PCR反应管瞬时离心,然后置于荧光PCR仪内,进行如下反应:

137℃孵育2分钟;295ºC预变性20秒;395ºC变性10秒,60ºC延伸30秒,共40个循环;设置60ºC收集FAMVIC/HEX荧光信号。

2 判定  

2.1 结果的有效性

2.1.1  单次试验的有效性  每次检测试验的阳性对照FAMVIC/HEX通道均应出现特异性扩增曲线且Ct值<35,阴性对照FAMVIC/HEX通道均无特异性扩增曲线或无Ct值,则试验成立,否则试验不成立。

2.1.2  单管反应的有效性  每个样品反应管的VIC/HEX通道Ct值≤37则该反应污染,该反应管检测不成立;当37Ct值<40时,可能存在污染;Ct值≥40或无特异性扩增曲线则该反应管检测成立。

2.2 结果判定  应结合FAM通道和VIC/HEX通道进行判定:在单次试验有效的前提下,单管反应有效时,FAM通道Ct值<40,则判为阳性;FAM通道Ct40或无特异性扩增曲线,则判为阴性。当单管反应可能存在污染时,FAM通道Ct值≤35,则判为阳性。其他情况均为可疑,需重新采样进行检测,两次可疑判为阳性;详见下表。

通道

Ct

FAM

35

40

40或无

VIC/HEX

37

污染

污染

污染

37Ct值<40

阳性

可疑

可疑

Ct值≥40或无

阳性

阳性

阴性

【注意事项】  

1 使用本试剂盒的实验室应严格按照国家有关规定进行管理。

2 酶反应液、引物探针配制成的PCR反应液对温度敏感容易失活,使用时应置于冰上,使用后应立即冻存,每盒反应液冻融次数不宜超过3次。

3 扩增试剂准备时应按阴性对照、待检核酸、阳性对照的顺序加入PCR反应管中。

4 吸取反应液时,应尽量避免产生气泡;加样结束后应盖紧反应管,以免液体蒸发造成结果不准确。

5 处理样品用器械及废弃物品应高压灭菌。检测过程中使用过的吸头,应直接打到盛有10% 84消毒液的带盖废物缸内。检测结束的PCR反应管,严禁开盖不得高压处理。

6 工作台及各种实验用品应定期清洁并用10% 84消毒液或紫外灯进行防污染处理。

7 各区域物品均为专用,不得交叉使用,以免污染。检测结束后,应立即对工作台进行清洁。

8 严禁使用超过有效期限的试剂;不同批号的试剂请勿混用。

9 使用ABI系列荧光定量PCR仪时请将仪器参数“Passive Reference”设置为“None”。

【规格】  50检份/

【贮藏与有效期】  -20℃以下冷冻保存,有效期15个月。

仅供兽医诊断使用


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