非洲猪瘟病毒荧光定量PCR快速检测试剂盒说明书
(简装)
兽用
【兽药名称】
通用名称:非洲猪瘟病毒荧光定量PCR快速检测试剂盒(简装)
商品名称:无
英文名称:African swine fever virus Real-time PCR rapid test kit(Simplified Products)
汉语拼音:Feizhouzhuwen Bingdu Yingguangdingliang PCR Kuaisu Jiance Shijihe(Jianzhuang)
【主要成分与含量】
编号 | 试剂盒组分 | 装量 |
50检份 | 100检份 |
E 01-q50 | 酶反应液 | 1000μl/管 | 1000μl/管×2 |
ASFV 02-qf50 | 引物探针 | 1管 | 2管 |
ASFV -qPC50 | 阳性对照 | 500μl/管 | 500μl/管 |
NC | 阴性对照 | 500μl/管 | 500μl/管 |
【作用与用途】 用于猪血液、脾脏、淋巴结、肾脏组织样品中的非洲猪瘟病毒核酸的检测。
【用法与判定】
1 用法
1.1 样品处理
采用DNA提取试剂盒或自动核酸提取仪提取各类样品中的待检DNA,低温保存。
1.2 扩增试剂准备
1.2.1 将引物探针(棕色管)和酶反应液瞬时离心后,将酶反应液全部移至引物探针(棕色管)中,颠倒混匀6次,充分混匀,配制成PCR反应液。
1.2.2 根据检测样品数量每个PCR反应管加入20 μl PCR反应液;先取5 μl阴性对照、再取5 μl待检DNA、最后取5 μl阳性对照(充分混匀)分别加到不同的PCR反应管中,加样结束后应盖紧PCR反应管,每个PCR反应管内液体的体积为25 μl。
1.3 荧光PCR反应 加样后将PCR反应管瞬时离心,然后置于荧光PCR仪内,进行如下反应:
1)37℃孵育2分钟;2) 95ºC预变性20秒;3) 95ºC变性10秒,58ºC延伸20秒,共40个循环;设置58ºC收集FAM荧光信号。
2 判定
2.1 结果的有效性 阳性对照应出现特异性扩增曲线且Ct值<35,且阴性对照无特异性扩增曲线或无Ct值,则试验成立;否则试验不成立。
2.2 结果判定 当样品的扩增结果有典型的扩增曲线且Ct值<40时可判定为非洲猪瘟病毒核酸阳性,Ct值<30时可判定为非洲猪瘟病毒核酸强阳性;当样品的扩增结果无Ct值或背景信号之下时,判定为非洲猪瘟病毒核酸阴性。
【注意事项】
(1) 使用本试剂盒的实验室应严格按照国家有关规定进行管理。
(2)酶反应液、引物探针配置成的PCR反应液对温度敏感容易失活,使用时应置于冰上,使用后应立即冻存,每盒反应液冻融次数不宜超过3次。
(3) 扩增试剂准备时应按阴性对照、待检核酸、阳性对照的顺序加入PCR反应管中。
(4) 吸取反应液时,应尽量避免产生气泡;加样结束后应盖紧反应管,以免液体蒸发造成结果不准确。
(5) 处理样品用器械及废弃物品应高压灭菌。检测过程中使用过的吸头,应直接打到盛有10% 84消毒液的带盖废物缸内。检测结束的PCR反应管,严禁开盖不得高压处理。
(6) 工作台及各种实验用品应定期清洁并用10% 84消毒液或紫外灯进行防污染处理。
(7) 各区域物品均为专用,不得交叉使用,以免污染。检测结束后,应立即对工作台进行清洁。
(8) 严禁使用超过有效期限的试剂;不同批号的试剂请勿混用。
(9) 使用ABI系列荧光定量PCR仪时请将仪器参数“Passive Reference”设置为“None”。
【规格】 (1)50检份/盒(2)100检份/盒
【贮藏与有效期】 -20℃以下冷冻保存,有效期15个月。
仅供兽医诊断使用