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产品名称:

非洲猪瘟病毒双重(p72 CD2v基因)荧光定量PCR检测试剂盒

上市日期: 2019-05-05

非洲猪瘟病毒双重(p72/CD2v基因)荧光定量PCR检测试剂盒说明书

兽用

【兽药名称】

通用名称  非洲猪瘟病毒双重(p72/CD2v基因)荧光定量PCR检测试剂盒

商品名称  

英文名称  African swine fever virusp72/CD2v geneDual Real-Time PCR Test Kit

汉语拼音  Feizhouzhuwenbingdu Shuangchongp72/CD2v JiyinYingguangdingliang

PCR Jianceshijihe

【主要成分与含量】

编号

试剂盒组分

装量

ASFV 01-qw/v50

荧光PCR反应液

625μl/

ASFV 02-qw/v50

引物混合液

375μl/

ASFV 03-qw/v50

阳性对照

500µl/

NC

阴性对照

500μl/

【作用与用途】  用于猪血液、脾脏、淋巴结、肾脏组织样品中的非洲猪瘟病毒p72基因和CD2v基因的检测。

【用法与判定】

1 用法

1.1 样品处理

采用DNA提取试剂盒或自动核酸提取仪提取各类样品中的待检DNA,低温保存。

1.2 扩增试剂准备  根据检测样品数量计算配液量,每个PCR反应含有12.5μl 荧光PCR反应液和7.5μl引物混合液,吹打混匀后分装到PCR反应管中,每管20μl。依次取5 μl阴性对照、5 μl待检DNA5 μl阳性对照(充分混匀)分别加到不同的PCR反应管中,加样结束后应盖紧PCR反应管,每个PCR反应管内液体的体积为25 μl

1.3 PCR反应  加样后将PCR反应管瞬时离心,然后置于荧光PCR仪内,进行如下反应:

1 95ºC预变性20秒;2 95ºC变性10秒,58ºC延伸20秒,共40个循环;设置58ºC收集FAMHEX荧光信号。

2 判定

2.1 结果的有效性

2.1.1 FAM信号和HEX信号通道下,阳性对照同时应出现特异性扩增曲线且Ct值<35,且阴性对照无特异性扩增曲线或无Ct值,则试验成立;否则试验不成立。

2.2 结果判定

2.2.1 非洲猪瘟病毒p72基因  FAM信号通道下样品的扩增结果有典型的扩增曲线且Ct值<40时可判定为非洲猪瘟病毒p72基因阳性;当样品的扩增结果无Ct值或背景信号之下时,判定为非洲猪瘟病毒p72基因阴性;样品的扩增结果有典型的扩增曲线且Ct值≥40时可判定为非洲猪瘟病毒p72基因可疑,需重新采样检测,如仍是可疑,可判定为非洲猪瘟病毒p72基因阳性。

2.2.2 非洲猪瘟病毒CD2v基因  HEX信号通道下样品的扩增结果有典型的扩增曲线且Ct值<40时可判定为非洲猪瘟病毒CD2v基因阳性;当样品的扩增结果无Ct值或背景信号之下时,判定为非洲猪瘟病毒CD2v基因阴性;样品的扩增结果有典型的扩增曲线且Ct值≥40时可判定为非洲猪瘟病毒CD2v基因可疑,需重新采样检测,如仍是可疑,可判定为非洲猪瘟病毒CD2v基因阳性。

【注意事项】

1 使用本试剂盒的实验室应严格按照国家有关规定进行管理。

2 荧光PCR反应液对温度敏感容易失活,使用时应置于冰上,使用后应立即冻存,冻融次数不宜超过3次。

3 扩增试剂准备时应按阴性对照、待检核酸、阳性对照的顺序加入PCR反应管中。

4 吸取反应液时,应尽量避免产生气泡;加样结束后应盖紧反应管,以免液体蒸发造成结果不准确。

5 处理样品用器械及废弃物品应高压灭菌。检测过程中使用过的吸头,应直接打到盛有10% 84消毒液的带盖废物缸内。检测结束的PCR反应管,严禁开盖不得高压处理。

6 工作台及各种实验用品应定期清洁并用10% 84消毒液或紫外灯进行防污染处理。

7 各区域物品均为专用,不得交叉使用,以免污染。检测结束后,应立即对工作台进行清洁。

8 严禁使用超过有效期限的试剂;不同批号的试剂请勿混用。

9 使用ABI系列荧光定量PCR仪时请将仪器参数“Passive Reference”设置为“None”。

【规格】  50检份/

【贮藏与有效期】  -20℃以下冷冻保存,有效期15个月。

 

 

仅供兽医诊断使用


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