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产品名称:

非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒

上市日期: 2019-05-05

非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒说明书

兽用

【兽药名称】

通用名  非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒

商品名  

英文名  African Swine Fever Virus Real-time PCR Detection Kit

汉语拼音  Feizhouzhuwenbingdu Yingguang PCR Jianceshijihe

主要成分与含量

组份

规格

荧光PCR预混液

900 μl/×1

阳性对照

100 μl/×1

阴性对照

100 μl/×1

说明书

1

作用与用途  用于全血、血清、淋巴结、脾脏、肾脏、扁桃体、肺、肌肉、环境样品等样品中非洲猪瘟病毒核酸的检测

用法与判定

1 用法

1.1  样品采集及处理

1.1.1  活猪样品  无菌采集抗凝血或血清5 ml

1.1.2  病死猪剖检样品或屠宰场剖检样品  无菌采集死猪的脾、肺、肾、扁桃体、淋巴结、肌肉等组织样品。28℃低温运至实验室用于检测。

1.1.3  病猪污染的周边环境  采集与病猪相关场所的粪便、饲料、污水样品。28℃低温运至实验室用于检测。

1.2  样品处理方法

1.2.1  脾、肺、肾等组织样品处理方法  取适当大小的组织块放入盛有PBS缓冲液的研磨管中,6000 r/min震荡研磨45秒,制成约10%的组织匀浆液,5000 r/min离心5分钟,取200μl上清液进行核酸提取。

1.2.2  粪便、饲料样品处理方法  取适量的粪便、饲料放入盛有PBS缓冲液的研磨管中,6000 r/min震荡研磨45秒,制成约10%的匀浆液,5000 r/min离心5分钟,取200 μl上清液进行核酸提取。

1.2.3  污水样品处理方法  直接取200 μl污水进行核酸提取。

1.3  样品核酸提取  采用DNA提取试剂盒或自动核酸提取仪提取各类样品中的核酸。低温保存待检。

1.4  PCR扩增  将试剂盒置室温使荧光PCR预混液、阴性对照和阳性对照完全溶解,并混匀。取18 μl荧光PCR预混液至每个反应管内,然后加2 μl所提取的样品核酸,每个反应总体积为20 μl。每次检测应设立阳性对照和阴性对照。在荧光PCR仪上进行扩增检测。

1.5  反应程序

37℃孵育2分钟,95℃预变性5分钟;95℃变性15秒,58℃退火延伸1分钟,45个循环,在每一循环的58℃时收集FAM荧光信号。

2  结果判定

2.1  阳性对照的Ct值应<30且出现特异性扩增曲线,阴性对照应无Ct值或Ct值≥40且无特异性扩增曲线,试验结果有效;否则应重新进行试验。

2.2  被检样品Ct值<40且出现特异性扩增曲线,判为阳性;当无Ct值或Ct值≥40,判为阴性。

【注意事项】  1PCR检测的每一步都应在专门区域或地点进行。

2) 使用前应将荧光PCR预混液、阴性对照和阳性对照完全溶化,充分振荡混匀,瞬时离心,尽量吸取液体上层。

3) 试剂盒不同组分间不得交叉,防止污染。

4) 避免反复冻融。

5PCR产物均应合理处理,以免造成污染。

6) 严格按照使用说明书进行操作。

7) 按要求贮藏,冷链运输;并在有效期内使用。

【规格】  50/

【贮藏与有效期】  -20℃以下保存,有效期为12个月。

 

 

 

 

 


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